Untersuchung der Antikörperkinetik von Lawsonia intracellularis und Vergleich zweier Messmethoden für Totalprotein im Serum von Fohlen

Das Ziel der ersten Studie waren die Untersuchung und die Beschreibung der Antikörperkinetik von Lawsonia intracellularis (L. intracellularis) bei Fohlen auf einem Warmblutgestüt in Deutschland mit Vorkommen von equiner proliferativer Enteropathie (EPE). Als serologisches Verfahren wurde der Immunoperoxidase Monolayer Assay (IPMA) angewendet. In der Studie wurden 63 Fohlen, die alle im Juli 2019 geboren wurden, im Alter von zwei bis 10 Monaten im Rahmen einer wöchentlichen Routineuntersuchung des Gestüts im zweiwöchentlichen Rhythmus klinisch untersucht und beprobt. Dabei wurde eine physische Untersuchung durchgeführt, die Rektalinnentemperatur gemessen und eine Blutprobe entnommen. Die daraus gewonnenen Serumproben (n = 1157) wurden zur Bestimmung der Gesamtprotein- und Albuminkonzentration sowie zur serologischen Analyse auf L. intracellularis spezifische Antikörper mit dem IPMA verwendet. Im Falle einer Hypoproteinämie (< 50 g/L) und/oder Hypoalbuminämie (< 25 g/L) wurde eine transabdominale Ultraschalluntersuchung des Dünndarms durchgeführt mit Fokus auf die Darmwanddicke. Sofern eine Hypoproteinämie/Hypoalbuminämie und eine Verdickung der Dünndarmwände (> 3 mm) vorlagen, wurde ein Kottupfer mittels einer PCR auf das Bakterium L. intracellularis untersucht. Insgesamt wurden bei 87,3% (55/63) der untersuchten Fohlen Antikörper gegen L. intracellularis nachgewiesen, jedoch nur 5,5% (3/55) dieser Fohlen entwickelten eine klinische EPE. Bei 32,7% (378/1157) der untersuchten Seren wurden Antikörper gegen L. intracellularis mit Titern zwischen 60 und 960 gemessen. Die Verläufe der einzelnen Antikörpertiter zeigten eine große Variabilität zwischen den Fohlen, so dass sich kein spezifisches Muster erkennen ließ. Da es keinen einheitlichen Titerverlauf gab und sowohl Fohlen mit als auch ohne EPE hohe Antikörpertiter (480 und 960) aufwiesen, die unterschiedlich lange nachweisbar waren, ist es nicht möglich, anhand von einzelnen seropositiven Proben Schlussfolgerungen hinsichtlich der Antikörperkinetik und des Krankheitsverlaufs bei Fohlen zu ziehen. Im Durchschnitt waren die L. intracellularis spezifischen Antikörper in dieser Studie über 12 Wochen messbar. Es wurden bei 7,3% (4/55) der Fohlen intermittierende Verläufe von Antikörpertitern gegen L. intracellularis festgestellt.Bei diesen Fohlen wurde der Antikörpertiterverlauf durch ein oder zwei negative Serumproben unterbrochen. Keines der Studienfohlen mit mindestens zwei aufeinanderfolgenden seropositiven Proben, die im Abstand von ungefähr zwei Wochen genommen wurden, erkrankte im späteren Verlauf der Studie an EPE. Aufgrund der niedrigen Erkrankungsrate an EPE (n = 3) sind allerdings weitere Studien erforderlich, um diese Aussage zu bestätigen. Der IPMA zeigte im Laufe der Studie einige technische Schwächen. Bei etwa 8,6% (100/1157) der Proben waren ein oder mehrere Wiederholungstests erforderlich, da aufgrund des starken Hintergrundgeschehens bei der mikroskopischen Untersuchung keine eindeutigen Ergebnisse auszuwerten waren oder Diskrepanzen zu dem vorherigen Testergebnis vorlagen. Daher ist es bei künftigen Studien über die Antikörperkinetik von L. intracellularis sowie bei serologischen Untersuchungen als diagnostisches Mittel empfehlenswert, alle Proben mit dem IPMA als Duplikat zu untersuchen.
In der zweiten Studie wurden die Messmethoden (Refraktometrie und Biuret-Reaktion) durch Messung der Gesamtproteinwerte im Serum von Fohlen desselben Gestüts miteinander verglichen. Totalprotein ist ein wichtiger Parameter im Überwachungs-management von L. intracellularis, da eine Hypoproteinämie (< 50 g/L) als diagnostisches Merkmal einer EPE gilt. Ziel war es daher, die Zuverlässigkeit der Totalproteinmessung mittels des Refraktometers bei Fohlen zu untersuchen und somit den Einsatz dieser Methode als geeignetes Hilfsdiagnostikum, zum Beispiel im Rahmen eines Lawsonien-Monitorings, zu prüfen. Weitere untersuchte Aspekte waren die Korrelationen zwischen den Totalproteinwerten beider Messverfahren und dem Albuminwert sowie der Einfluss der Außentemperaturen auf die angewandten Messmethoden. Insgesamt wurde die Totalproteinkonzentration in 772 Serumproben von 744 gesunden und kranken Fohlen im Alter von einem bis acht Monaten mittels Refraktometrie und Biuret-Reaktion gemessen. Die untersuchten Proben stammten aus einem auf dem Gestüt durchgeführten Lawsonien-Monitoring der Monate August bis Oktober 2019. Die beiden Messmethoden wurden anhand der Gesamteiweißwerte innerhalb von zwei Gruppen (A und B) miteinander verglichen. Bei der Probenentnahme lag in Gruppe B eine höhere Außentemperatur (33°C) vor als in Gruppe A (≤ 29°C). Die Gruppe A (Außentemperaturen ≤ 29°C) umfasste 696 Serumproben von 696 gesunden und kranken Fohlen, deren Proben über einen Zeitraum von acht Wochen genommen wurden. Gruppe B (Außentemperatur 33°C) umfasste 76 Serumproben von 76 gesunden und kranken Fohlen, die alle an einem einzigen Tag genommen wurden. In jeder Gruppe (A und B) wurden die zwei Messmethoden jeweils anhand des Totalproteinwertes einer Serumprobe pro Fohlen miteinander verglichen. Von einer kleinen Anzahl an Fohlen (n = 28) wurde je eine Probe in beiden Gruppen untersucht, die in unterschiedlichen Kalenderwochen entnommen wurden. Am Tag der Probennahme wurde das Gesamteiweiß mit einem Handrefraktometer und innerhalb von 24 Stunden nach der Probenentnahme mit der Biuret-Reaktion in einem externen Labor gemessen. Zusätzlich wurde die Albuminkonzentration mittels Turbidimetrie bestimmt. Die Auswertung zeigte sowohl in Gruppe A (Außentemperaturen ≤ 29°C) als auch in Gruppe B (Außentemperatur 33°C) eine positive Korrelation zwischen den Totalproteinwerten der beiden Messmethoden sowie zwischen den Totalprotein- und Albuminwerten. Bei Außentemperaturen ≤ 29°C gab es eine gute Übereinstimmung (p = 0,98) bei der Messung der Gesamteiweißwerte mittels Refraktometrie und Biuret-Reaktion. Somit ist das Refraktometer eine mögliche akzeptable Alternative zur chemischen Messung von Serum-Totalprotein bei Fohlen. Allerdings gab es bei Außentemperaturen von 33°C signifikante Unterschiede (p <.0001) zwischen den Messmethoden. Daher ist bei der Verwendung des Refraktometers generell darauf zu achten, dass die Proben bei moderaten Außentemperaturen (≤ 29°C) genommen werden oder nach der Entnahme zeitnah analysiert oder gekühlt gelagert werden, um längere Hitzeeinwirkung zu vermeiden. Wenn dies nicht möglich ist, ist eine Messung der Seren mittels der Biuret-Reaktion zu empfehlen. Aufgrund der geringen Anzahl an Proben (n = 31) aller Totalproteinwerten < 50 g/L in dieser Studie, können keine Rückschlüsse auf die Präzision und die Vergleichbarkeit der beiden angewandten Messmethoden für den für L. intracellularis interessanten Messbereich gezogen werden. Diese Studie hat jedoch gezeigt, dass die Refraktometrie eine geeignete Methode zur Messung von Serum-Totalprotein bei Außentemperaturen ≤ 29°C darstellt.