Molecular characterization of the spike protein of an avian infectious bronchitis virus (IBV) with cell culture tropism and identification of the underlying determinants
Avian infectious bronchitis virus (IBV) is the causative agent of the disease infectious bronchitis in chickens which occurs globally and causes significant economic damage. The control of IBV remains a challenge and vaccination against IBV is performed extensively. Because of the restricted species tropism of IBV, vaccine strains have to be cultivated in embryonated chicken eggs (ECEs), which represent a laborious and expensive propagation method. The possibility of in vitro propagation of IBV vaccines in cell culture is highly desired. Usually, IBV strains cannot be propagated in cell lines apart from one exception: The Beaudette strain allows in vitro propagation in cell lines and thus has already been extensively characterized. Certain amino acids in the Beaudette spike protein were identified to be responsible for the ability of Beaudette to infect cell lines. However, so far cell culture-adapted IBV strains based on the Beaudette strain have failed to confer sufficient protection against challenge because of the apathogenic nature of the Beaudette strain. IB66HP, an IBV strain that was adapted to EB66® cells, represents a novel IBV strain with cell culture tropism. The objective of this thesis was to determine the molecular determinants responsible for the cell culture tropism of IB66HP in comparison to the determinants described for IBV Beaudette. An IBV reverse genetic system was used to generate several recombinant IBVs (rIBVs) for in depths analysis of the influence of the IB66HP spike protein sequence in the context of the egg-restricted IBV H52.
Das Infektiöse-Bronchitis-Virus (IBV) ist der Auslöser der infektiösen Bronchitis der Hühner. Die Krankheit tritt weltweit auf und ist verantwortlich für große wirtschaftliche Schäden. Die Bekämpfung des Virus wird vorwiegend durch Impfungen vorgenommen. Durch den engen Wirtstropismus von IBV müssen Impfstoffe im bebrüteten Hühnerei kultiviert werden, was zeit- und kostenintensiv ist. Die Möglichkeit der in vitro Propagation von IBV ist daher wünschenswert. IBV Stämme können nicht in Zelllinien propagiert werden, mit der Ausnahme des Beaudette Stammes, welcher in der Lage ist Zelllinien zu infizieren. Der Beaudette Stamm ist daher Gegenstand intensiver Forschungen und bestimmte Aminosäuren im Spike-Protein wurden als maßgeblich für den Zellkulturtropismus beschrieben. Impfstoffe, die auf dem Beaudette Stamm basieren, können bisher nicht ausreichend Schutz induzieren, da Beaudette im Huhn nicht mehr genügend Immunantwort auslöst. IB66HP, ein IBV Stamm der an EB66® adaptiert wurde, stellt einen neuartigen IBV Stamm mit Zellkulturtropismus dar. Das Ziel dieser Arbeit war die für den Zellkulturtropismus verantwortlichen molekularen Determinanten von IB66HP zu bestimmen und diese mit Beaudette zu vergleichen. Ein Revers-genetisches System wurde verwendet, um rekombinante IBVs (rIBVs) zu generieren, die tiefgreifende Untersuchungen auf den Einfluß der Spike-Sequenz von IB66HP im Kontext des nicht zellkulturgängigen H52 Stammes erlaubten.
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