Pharmakologische Beeinflussung muriner dendritischer Zellen durch nichtsteroidale und steroidale Antiphlogistika

In der vorliegenden Arbeit wurde der Einfluss nichtsteroidaler und steroidaler Antiphlogistika auf dendritische Zellen in vitro und in vivo untersucht. Bei den In-vivo-Untersuchungen war von besonderem Interesse, ob die eingesetzten Testsubstanzen die allergische Immunreaktion sowohl in der Sensibilisierungs,- als auch in der Challenge-Phase hemmen können und somit die Manifestation der Kontaktallergie unterdrückt wird. Als nichtsteroidale Antiphlogistika wurden ASS, Indometacin und Tepoxalin eingesetzt, als steroidales Antiphlogistikum wurde Diflorasondiacetat verwendet. In vitro wurde die Wirkung der Pharmaka auf die LPS-stimulierte TNF-a- und PGE2-Synthese untersucht. Sowohl TNF-a als auch PGE2 spielen eine wichtige Rolle bei der Maturation und Migration der DC. Dazu wurden aus murinem Knochenmark DC gewonnen, mit den Testsubstanzen inkubiert und die Zytokin bzw. Prostaglandinkonzentration mittels ELISA gemessen. Die LPS-induzierte PGE2-Synthese wurde von allen eingesetzten Substanzen signifikant gehemmt. Auf die TNF-a-Synthese dagegen hatte Indometacin keinen und Tepoxalin (10 µmol/l) nur eine moderaten Effekt. Eine signifikante Inhibition wurde nur durch ASS (2,5 und 5 mmol/l) und Diflorasondiacetat erreicht. Die In-vivo-Untersuchungen wurden in einem murinen TDI-Kontaktallergiemodell in der Sensibilisierung und in der Challenge durchgeführt. In der Sensibilisierung wurde die Wirkung der Substanzen auf die Migration der DC (Skin-DC-Migration-Assay), auf die DC-T-Zellinteraktion anhand des Lymphknotengewichtes und der Gesamtzellzahl des Lymphknotens, auf die CD11c+-Zellpopulation in den Lymphknoten (LLNA), sowie auf die Expression der MMP-9 untersucht. In der Challengephase wurden als zusätzliche Parameter die Ohrschwellung (MEST), die Bestimmung der in den Lymphknoten migrierten epidermalen und dermalen DC (CD11c+- und CD40+-Zellen) und die Bestimmung der MHC-II+-Zellen in der Epidermis verwendet. Außerdem wurde in den Gewebehomogenaten der mit ASS, Indometacin und Diflorasondiacetat behandelten Tiere die PGE2-Konzentration gemessen. Aufgrund der moderaten Effekte nach topischer Applikaton von ASS, wurde in Analogie zu dem In-vivo-Versuch, die transdermale Resorption von ASS durch die Bauchhaut von Mäusen bestimmt. Die Ergebnisse der In-vivo-Versuche als auch die Ergebnisse der Versuche zur transdermalen Resorption lassen vermuten, dass ausreichende Gewebespiegel von ASS nach topischer Applikation, für eine Hemmung der COX oder sogar von NF-kB, nur in oberflächlich gelegenen Gewebearealen erreicht werden. Die Ergebnisse der In-vivo-Untersuchungen verdeutlichen, dass die Inhibition der DC-Migration allein nicht ausreicht, um das klinische Bild der Kontaktallergie zu unterdrücken. Es müssen noch andere Faktoren bei der Vermittlung der Immunantwort eine Rolle spielen. Im TDI-Kontaktallergiemodell wurde die Induktion der Kontaktallergie durch ASS (systemisch) nicht unterdrückt, obwohl alle anderen Untersuchungsparameter durch die systemische Applikation von ASS signifikant im Vergleich zur Kontrollgruppe gehemmt wurden. Während ASS direkt die DC-Funktion beeinflusst, ist für Indometacin offensichtlich ein anderer Effektormechanismus anzunehmen. Indometacin hemmt zwar die T-Zell-vermittelte Immunantwort sowie die T-Zellproliferation, nicht aber in vivo die Migration der dermalen DC in den drainierenden Lymphknoten sowie die MMP-9-Aktivität. Nur ex vivo konnte eine Migrationsinhibition (Skin-DC-Migration-Assay) beobachtet werden, sowie eine Hemmung der LC-Migration. Sowohl die Kontaktallergie als auch die Funktion der DC wird nur durch Diflorasondiacetat wirkungsvoll inhibiert. Die Behandlung mit Tepoxalin hat, unabhängig von der Verabreichung, keine Wirkung auf die allergische Entzündungsreaktion. In der Sensibilisierungsphase hatte nur Diflorasondiacetat Einfluss auf die Migration der DC sowie die DC-T-Zell-Interaktion.