Entwicklung eines funktionellen in vitro Test (FIT) zur Prüfung der Sensibilisierung feliner basophiler Granulozyten von Katzen mit kontrollierter Flohexposition (Ctenocephalides felis felis)

Die Flohspeichelallergie ist eine der häufigsten Ursachen für Hauterkrankungen bei Katzen. Um einen Verdacht auf Flohspeichelallergie zu äußern, müssen die Tiere eine Reihe anamnestischer und klinischer Kriterien erfüllen. Zur immunologischen Absicherung der klinischen Verdachtsdiagnose und zur Ermittlung des auslösenden Allergens stehen gegenwärtig verschiedene in vivo und in vitro Methoden zur Verfügung. Diese weisen jedoch gerade für Katzen unzureichend exakte Ergebnisse auf. Der Wunsch, die für die Typ I Allergie verantwortlichen Vorgänge nachzuweisen, führte an der Arbeitsgruppe Immunologie zur Entwicklung eines funktionellen in vitro Tests (FIT) zur Diagnose der Typ I Allergie des Pferdes. Der FIT ermöglicht es, basophile Granulozyten in vitro auf ihre in vivo Sensibilisierung gegen bestimmte Allergene zu prüfen, um sensibilisierte von nicht-sensibilisierten Tieren zu unterscheiden. Dazu wird die nach Stimulation mit einer Allergen-Präparation selektiv aus Basophilen freigesetzte Histaminmenge bewertet (spezifische Sensibilisierung). Parallel dazu wird die Gesamthistaminmenge, die spontane Freisetzung und die generelle Fähigkeit Basophiler, nach Kreuzvernetzung membranständiger Immunglobuline zu degranulieren (generelle Sensibilisierung), überprüft. Ziel dieser Arbeit war es, mit dem FIT die Histaminfreisetzung aus basophilen Granulozyten der Katze näher zu untersuchen, um ihre Eignung für eine in vitro Diagnostik der Flohspeichelallergie bewerten zu können. (I) Dazu sollte der FIT zur Testdurchführung mit gewaschenem Vollblut der Katze adaptiert werden. (II) Zum empfindlicheren Nachweis der Basophilen-Sensibilisierung sollten diese angereichert werden und dann mit denjenigen aus Vollblut im FIT verglichen werden. (III) Um zu überprüfen, ob sich Basophile der Katze als Indikator für eine C. felis–spezifische Typ I Sensibilisierung eignen, sollte mit dem FIT der Einfluss wiederholter Flohexpositionen auf den funktionellen Sensibilisierungsgrad feliner Basophiler geprüft werden. (IV) Zur Überprüfung der Aussagekraft des FIT als Meßsystem für eine funktionelle Basophilen-Sensibilisierung, sollten die Befunde des FIT mit denen aus dem Intrakutantest (Mastzellen-Sensibilisierung) und aus der Prüfung Flohantigen-spezifischer IgE-Antikörper im Serum verglichen werden. Zusammenfassend konnten durch die im FIT erhaltenen Parallelinformationen neue Erkenntnisse über das Sensibilisierungsverhalten basophiler Granulozyten der Katze gewonnen werden. Eine Gruppe von 14 Katzen, die über einen Zeitraum von sieben Monaten wöchentlich wiederholt ca. 100 C. felis pro Tier ausgesetzt wurde, zeigte individuelle Unterschiede in Grad und Verlauf der spezifischen Sensibilisierung gegen die Ctenocephalides-Präparation. Es ließen sich drei Sensibilisierungsmuster zusammenfassen: Katzen, bei denen sich eine bereits bestehende Basophilen-Sensibilisierung verstärkte; Tiere, die zu keiner Zeit eine Sensibilisierung zeigten und Katzen, die durch wiederholte Flohexpositionen eine Basophilen-Sensibilisierung entwickelten. Die Entwicklung der Sensibilisierung konnte nach 16 – 24-wöchiger Antigenkonfrontation mit dem FIT nachgewiesen werden. Es konnte weiterhin gezeigt werden, dass die durch wiederholte, kontrollierte Flohexpositionen induzierte Basophilen-Sensibilisierung nach 7-wöchiger Allergenkarenz weitgehend wieder verloren gehen kann. Eine Besonderheit des FIT lag ferner in der Erkennung spezifisch gegen C. felis sensibilisierter, aber klinisch gesunder Katzen. Die Art der Regulationsmechanismen, die trotz einer funktionell ausreichenden Sensibilisierung die klinische Ausprägung der Allergie verhindern, ist jedoch bis heute unklar. Während die nachweisbare Sensibilisierung der Mastzellen (im Intrakutantest) und der Basophilen (im FIT) in der untersuchten Katzenpopulation weitgehend übereinstimmten, zeigte die Basophilen-Sensibilisierung keine Übereinstimmung mit dem Spiegel an freien IgE-Antikörpern gegen Flohspeichelantigene im Serum. Wurde jedoch die gleiche Ganzfloh-Präparation, die im FIT eingesetzt wurde, auch als Antigen im IgE-ELISA genutzt, so zeigte sich anfangs (Woche -3 und 14) keine und am Ende der Expositionsphase (Woche 28) eine deutliche Übereinstimmung mit den FIT-Ergebnissen. Die Basophilen-Sensibilisierung war außerdem ein empfindlicherer und schnellerer Indikator für eine Typ I Sensibilisierung als die Mastzellen-Sensibilisierung. Es zeigte sich also, dass der FIT ein empfindliches Nachweisverfahren für eine funktionelle Typ I Sensibilisierung feliner allergischer Effektorzellen ist. Somit stellt der FIT ein klinisch relevantes Verfahren zur Prüfung der Grundvoraussetzung für eine Flohallergie bei Katzen dar, ohne die Tiere durch den Nachweis zu belasten. Dazu sollte in zukünftigen Untersuchungen die Sensitivität und die Spezifität dieses Verfahrens unter Feldbedingungen ermittelt werden. Ferner könnte eine Untersuchung der an die Fc-Rezeptoren auf Basophilen gebundenen Immunglobulin-Isotypen zur Beurteilung der Qualität der Sensibilisierung wichtig werden.