Entwicklung von Verfahren zum direkten Nachweis von M. avium subsp. paratuberculosis aus Rohmilch

Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) ist der Erreger der Paratuberkulose bzw. Johne‘schen Erkrankung, einer weltweit auftretenden chronisch granulomatösen Enteritis bei Wiederkäuern, die zu bedeutenden wirtschaftlichen Verlusten führt. Der Erreger wird in der subklinischen Phase der Erkrankung intermittierend mit dem Kot und in der Milch ausgeschieden. Das klinische Bild der Erkrankung zeigt sich aber meist erst nach einer sehr langen Inkubationszeit von bis zu fünf Jahren. Bis heute ist kein diagnostischer Test erhältlich, der eine schnelle und sensitive Diagnose von MAP in Milch ermöglicht. In der vorliegenden Arbeit wurde das aus einer Phagen-Peptid Bibliothek isolierte MAP-spezifische und hoch affine Peptid aMptD verwendet, um den Erreger mittels Peptid-vermittelter „Capture“ PCR, basierend auf dem MAP spezifischen Element ISMav2, in Milch nachzuweisen. Die Peptid aMptD-vermittelte „Capture“-PCR ermöglichte neben dem Nachweis von nur 100 Erregern pro Milliliter künstlich kontaminierter Milch auch den reproduzierbaren Erregernachweis in Milchproben von infizierten Kühen und in Sammelmilchproben von serologisch positiven Herden. Da die Peptid-vermittelte „Capture“-PCR ausschließlich auf standardisierten Reagenzien basiert, könnte diese für die routinemäßige Untersuchung von Sammelmilchproben eingesetzt werden. Zudem konnte gezeigt werden, dass die Ergebnisse der „Capture“-PCR mit den Ergebnissen eines Sammelmilch-ELISA korrelieren. Der Einsatz dieser beiden unabhängigen Testsysteme in einem Zwei-Stufen Programm würde die kostengünstige Kontrolle und Überwachung der Paratuberkulose in Milchviehbeständen ermöglichen und so den Erregereintrag in die Umwelt und das Lebensmittel Milch stark reduzieren.