Untersuchung flüssigkonservierten Eberspermas mittels computergestützter Spermienanalyse und Bindung FITC-konjugierter Mannose an die Spermienmembran

Veränderungen an flüssigkonserviertem Ebersperma während der ersten Tage der Lagerung können mit standardspermatologischen Untersuchungen nicht zufriedenstellend erkannt wer­den. In der vorliegenden Arbeit sollte geprüft werden, ob lagerungsbedingte Veränderungen mit Hilfe von computergestützten Analyseverfahren erfassbar sind. Im Besonderen sollte an flüssigkonserviertem Ebersperma die Motilität computergestützt und die Mannosebindungs­fähigkeit der Spermienmembran flowzytometrisch untersucht werden. Für den ersten Teil waren zunächst Richtlinien für die Standardisierung der computergestütz­ten Spermiena­nalyse mit dem SpermVi­sionTM-System (Version 2004) der Firma Minitüb (Tie­fenbach, Deutsch­land) in der Messkammer der Firma Leja (Nieuw-Vennep, Holland) hin­sichtlich Probenvorbereitung und Messung festzulegen. Das SpermVi­sionTM-System analy­siert zugleich Motilität und Konzentration von Samenproben. Es wurde der Einfluss der Kon­zentration, des Zeitintervalls zwischen Kammerfüllung und Messbeginn, der Messdauer, der Auswahl der Messfelder, des Verdünners und der Ejakulatsbeschaffenheit (Agglutinationen, Fremdbeimengungen) auf die Konzentrations- und Motilitätsmessung untersucht. Zur Prüfung der resultierenden Empfehlungen wurde in split-sample-Versuchen Konzentration und Moti­lität zusätzlich mit klassischen und mit modernen Methoden bestimmt und die Ergebnisse verglichen. Diese Untersuchungen attestierten dem SpermVi­sionTM-System, bei exakter Ein­haltung der Messempfehlungen, sowohl eine gute Wiederholbarkeit als auch eine hohe Ge­nauigkeit. Desweiteren sollten lagerungsbedingte Veränderungen von flüssigkonserviertem Ebersperma hinsichtlich computergestützt ermittelter Motilitätsparameter und Membranstatus untersucht werden. Dazu wurden Samenproben von 34 Ebern aus zwei Stationen vom 2. bis zum 13. Lagerungstag untersucht. Die Proben, die noch am 9. Lagerungstag mehr als 70 % subjektive Motilität aufwiesen, zeigten bis zum 9. Lagerungstag keine signifikanten Veränderungen der computergestützt ermittelten prozentualen Motilitätsparameter. Die motilen Spermien aus diesen Proben hingegen zeigten signifikante Zunahmen der absoluten Strecken- und Ge­schwindigkeitswerte (Strecke der mittleren Bahn DAP, Geschwindigkeit auf der mittleren Bahn VAP, etc.) sowie der Amplitude des Kopfausschlages (ALH) in diesem Zeitraum. Die Parameter, welche den Gradeauslauf der Spermienbewegung beschreiben (Linearität LIN, Geradlinigkeit STR), nahmen jedoch signi­fikant ab. Weiterhin zeigten die mittels Flowzyto­meter bestimmten Membran- und Akro­somintegritätsparameter im gleichen Zeitraum eine signifikante Verminderung der Werte. Im zweiten Teil war zu prüfen, inwieweit sich die Mannosebindungsfähigkeit der Ebersper­mien während der Lagerung verändert. Dazu wurde FITC-gekoppelte Mannose mit Eberspermien inkubiert und es wurde versucht die Qualität- und Quantität der Bindung flow­zytometrisch zu charakterisieren. Hierfür wurde die Konzentration der Mannose sowie die Inkubationszeiten variiert, die Bindung versucht kompetitiv zu hemmen und das Bindungs­verhalten von Galaktose und Glucitol vergleichend zu Mannose, bei Inkubation unter Kapa­zitationsbedingungen, verglichen. Durch flowzytometrische und fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen konnte eine spezifische Bindung von Mannose-PAA-FITC und Mannose-BSA-FITC an intakte Eberspermien jedoch nicht nachgewiesen werden. Die fluoreszenzmar­kierten Zucker banden vor allem an geschwollene, agglutinierte und akrosomreagierte Sper­mienköpfe. Schlussfolgernd ist festzustellen, dass in der vorliegenden Arbeit die flowzytometrische Analyse der Mannosebindung an die Spermienplasmamembran nicht geeignet war, um den Lagerungseinfluss auf flüssigkonserviertes Ebersperma sichtbar zu machen. Auch die mit SpermVisionTM erhobenen Motilitätsparameter Gesamt- und progressive Motilität waren nicht ausreichend sensitiv. Parameter, die Spermienbewegungsmuster charakterisieren, schienen hingegen das Potential zu haben, kapazitationsähnliche Veränderungen an flüssigkonservier­tem Ebersperma darzustellen