Klinische Untersuchung zur prospektiven Klassifizierung subfertiler Stuten

Ziel der Untersuchung war es, herauszufinden, inwiefern sich Reproduktionsstörungen bei Problemstuten, die zu besamungsinduzierter Endometritis neigen, auf eine gestörte Kontraktionsaktivität der Gebärmutter zurückführen lassen. Zusätzlich sollte überprüft werden, ob mit Seminalplasma eine ähnliche kontraktionsstimulierende Wirkung wie mit Oxytocin erreicht werden kann, und ob sich diese Behandlung direkt post inseminationem positiv auf die Trächtigkeitsrate auswirkt. Des weiteren wurde untersucht, ob die Uteruskontraktionsaktivität die uterinen mikrobiologischen und zytologischen Befunde prae und post inseminationem beeinflusst, und ob Beziehungen zum Entstehen einer Gravidität bestehen.   Für die Studie standen 62 Warmblutstuten (4 bis 21 Jahre) zur Verfügung, die in 94 Zyklen untersucht wurden. Dabei entfielen 12 Stuten mit Fohlen bei Fuß auf die fertile Kontrollgruppe. Die restlichen 50 Stuten, die in der letzten Decksaison güst geblieben waren, wurden in insgesamt 82 Zyklen untersucht, zufällig auf die drei Versuchsgruppen: Oxytocin (n = 27), Seminalplasma (n = 25) und unbehandelt (n = 30) aufgeteilt und mit  Frischsamen zweier fertiler Hengste besamt (Besamungsdosis 500 x 106 vorwärtsbeweglicheSpermien in 12 ml Inseminatvolumen). Dazu wurde die Ovulation bei ultrasonographischem Nachweis eines Follikels von mindestens 35 mm Durchmesser durch die intravenöse Gabe von 2500 IE hCG induziert, und alle Stuten 24 und 48 h nach hCG-Gabe in das Corpus uteri besamt. Je nach Versuchsgruppe wurde den Stuten direkt nach der Besamung 20 IE Oxytocin injiziert, 20 ml Seminalplasma aus einem Seminalplasmapool intrauterin verabreicht oder sie blieben unbehandelt. Die uterine Kontraktionsaktivität wurde mittels transrektaler Ultrasonographie am Tag 16-18 nach der letzten Rosse (KA1), direkt vor und nach der ersten (KA2 und KA3a/b) und zweiten Insemination (KA4 und KA5), sowie 48 h nach der zweiten Besamung zum Ende der uterinen Clearance (KA6) bestimmt. Dazu wurde die Ultraschallsonde (Linearschallkopf, 6,0 MHz) quer über das Uterushorn ipsilateral zum dominaten/ovulierten Follikel positioniert und die Gebärmutterkontraktionen über 5, bzw. 10 Minuten nach der ersten Besamung, erfasst. Die Auswertung der Kontraktionsaktivität erfolgte mit Hilfe eines Scoresystems von 0 (keine Kontraktionen) bis IV (sehr starke Kontraktionen). Zusätzlich wurde von allen Stuten bei der Eingangsuntersuchung ein Endometriumsbioptat gewonnen, sowie vor der ersten und 48 h nach der zweiten Besamung Uterustupferproben für eine mikrobiologische und zytologische Auswertung genommen. Außerdem wurde mittels einer Uteruslavage, die 2 h nach Insemination durchgeführt wurde, untersucht, inwiefern Oxytocin, direkt postinseminatorisch verabreicht, einen Einfluss auf eine eventuell vorzeitige Elimination der Spermien aus der Gebärmutter hat.   Folgende Ergebnisse wurden erarbeitet: 1. Ein Vergleich der mittleren uterinen Kontraktionsaktivität aller Stuten (n = 94) ergab deutliche Unterschiede zwischen fast allen Messzeitpunkten. So zeigten sich signifikante Unterschiede (P < 0,002) zwischen KA1 (16-18 Tage nach der letzten Rosse) und allen anderen Messzeitpunkten, zwischen den Uteruskontraktionen vor (KA2 und KA4) und nach (KA3a/b und KA5) der Insemination (P < 0,0001), sowie zwischen der Uterusmotilität nach der Besamung (KA3a/b und KA5) und 48 nach der zweiten Besamung (KA6) (P < 0,0001). Nach der zweiten Insemination war zusätzlich eine hochsignifikant stärkere uterine Kontraktionsaktivität (P < 0,0001) zu verzeichnen als nach der ersten Besamung, während direkt vor den Samenübertragungen nahezu identische Aktivitätsniveaus auffielen.   2. Vergleicht man die Kontraktionsaktivität zwischen den Gruppen, so zeigte die Kontrollgruppe ein allgemein höheres Aktivitätsniveau. Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen ließen sich zum Zeitpunkt KA1 zwischen der Kontrollgruppe und allen Versuchsgruppen (P < 0,02), zum Messzeitpunkt KA3b nach der ersten Besamung zwischen der Oxytocin- und Kontrollgruppe auf der einen Seite und der Seminalplasma- und der unbehandelten Gruppe auf der anderen Seite (P < 0,02) darstellen. Nach der zweiten Insemination zeigte die Oxytocingruppe signifikant stärkere uterine Kontraktionen als die Seminalplasma- und die unbehandelte Gruppe (P < 0,05), die Kontrollgruppe  aber nur noch gegenüber der unbehandelt gebliebenen Gruppe (P < 0,05). Die Kontraktionsaktivität der Gebärmutter in der Seminalplasma- und der unbehandelten Gruppe unterschied sich zu keinen Zeitpunkt signifikant voneinander.   3. Trotz der verstärkten Uteruskontraktionen bei der mit Oxytocin behandelten Gruppe, die jedoch nicht über das Kontrollniveau hinausging, gab es keine Hinweise darauf, dass Oxytocin, in einer Menge von 20 IE post inseminationem verabreicht, einen frühzeitigen Rückfluss des Inseminats aus dem Uterus bedingte.   4. Zwischen der Uteruskontraktionsaktivität und dem Trächtigkeitsergebnis konnte ein positiver Zusammenhang gezeigt werden. Es konnte aber kein Zusammenhang zwischen der Uterusmotilität und den Ergebnissen der mikrobiologischen und zytologischen Untersuchung der Gebärmutter gebildet werden.   5. Beim Vergleich der zu den zwei Probezeitpunkten (BU1 und ZYTO1 vor der ersten Besamung und BU2 und ZYTO2 48 h nach der zweiten Besamung) gewonnenen bakteriologischen und zytologischen Ergebnissen konnte kein signifikanter Unterschied festgestellt werden. Zum Zeitpunkt 1 waren  54 % der bakteriologischen und 47 % der zytologischen Proben, zum Zeitpunkt 2 56% der bakteriologischen und 64 % der zytologischen Proben negativ. Beim Behandlungsgruppenvergleich zeigten sich signifikant weniger positive Proben bei BU2 (P = 0,02) bei der Oxytocin- als bei der Seminalplasmagruppe. Insgesamt ließen sich bei allen Gruppen 48 h nach der zweiten Insemination weniger positive zytologischen Proben als vor der ersten Besamung feststellen. Gleiches galt auch für die positiven mikrobiologischen Proben, mit Ausnahme bei der mit Seminalplasma behandelten Gruppe. Außerdem konnte ein signifikanter Zusammenhang (P < 0,0001) zwischen der 48 h nach der Besamung erhobenen zytologischen Probe und dem Ergebnis der Trächtigkeitsuntersuchung hergestellt werden. Bei 79 % der nicht tragenden Stuten konnten 48 h nach der zweiten Besamung Leukozyten im Uterus nachgewiesen werden, und 60 % der Stuten mit positivem Befruchtungsergebnis hatten 48 h nach der zweiten Besamung eine negative Zytologie.   6. Des weiteren konnte gezeigt werden, dass das Biopsieergebnis, sowie die Saison keinen Einfluss auf das Trächtigkeitsergebnis hatten. Jüngere Stuten wurden aber signifikant           (P < 0,05) besser tragend als ältere Stuten.   7. Das Ergebnis der Trächtigkeitsuntersuchung unterschied sich signifikant (P < 0,05) zwischen der Kontrollgruppe (83 %) und den Versuchsgruppen (40 %).   Die Untersuchungen verdeutlichen, dass die Uteruskontraktionsaktiviät durch die Besamung angeregt wird und sich bei aufeinanderfolgenden Besamungen noch signifikant steigert. Insgesamt ist bei subfertilen Stuten eine schwächere Myometriumsaktivität feststellbar als bei fertilen Tieren. Die Uteruskontraktionsaktivität ließ sich mit Hilfe von Oxytocin, nicht aber mit zusätzlich intrauterin verabreichtem Seminalplasma steigern. Die niedrige Trächtigkeitsrate in der Oxytocingruppe konnte nicht mit einer vorzeitigen Elimination der Spermien aus der Gebärmutter aufgrund einer direkt postinseminatorisch verabreichten Oxytocininjektion in Zusammenhang gebracht werden. Da ein positiver Zusammenhang zwischen der Kontraktionsaktivität und dem Trächtigkeitssergebnis festgestellt werden konnte, ist eine verringerte uterine Aktivität als eine Ursache von suboptimaler Fertilität bei Stuten zu sehen. Hinsichtlich eines positiven Trächtigkeitsergebnisses war auch der Nachweis von PMNs im Uterus 48 h nach der Besamung von Bedeutung. Stuten mit einem positiven zytologischen Tupfer zu diesem Zeitpunkt hatten die geringsten Trächtigkeitschancen. Daher sollte über eine optimale Besamungsfrequenz und die Art und den Zeitpunkt der Probennahme aus der Gebärmutter nachgedacht werden.