Vergleichende Darstellung der DNA-Methyltransferase 1 und 3a mittels Immunzytochemie in frühen bovinen Embryonalstadien (Tag 1-7) aus In-vivo- und In-vitro-Produktion

Drallmeyer, Sonja

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Vergleichende Darstellung der DNA-Methyltransferase 1 und 3a mittels Immunzytochemie in frühen bovinen Embryonalstadien (Tag 1-7) aus In-vivo- und In-vitro-Produktion

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In dieser Arbeit wurde das Auftreten des DNMT1- und des DNMT3a-Proteins in frühen Embryonalstadien (Zygote - Blastozyste) untersucht, wobei der Schwerpunkt auf einem Vergleich in vivo und in vitro produzierter Embryonen lag. Die tubalen In-vivo-Stadien wurden mittels transvaginaler endoskopischer Eileiterspülung generiert, wohingegen die späteren Stadien (Morulae und Blastozysten) durch alleinige uterine Spülung gewonnen wurden. Parallel dazu erfolgte die routinemäßige Produktion von IVP-Embryonen. Nach der immunzytochemischen Markierung der Proteine erfolgte ihre Darstellung über die Immunfluoreszenz am konfokalen Laser-Scanning-Mikroskop. Dabei konnten signifikante Unterschiede des relativen Proteingehaltes und der Proteinlokalisation der DNA-Methyltransferase 1 und 3a zwischen in vivo und in vitro produzierten Embryonen nachgewiesen werden.

In this work the expression of DNMT1 and DNMT3a in early embryonal stages (zygote – blastocyst) was analyzed with a main focus on the comparison between in vivo and in vitro derived embryos. The tubal stage in vivo embryos were derived by transvaginal endoscopic flushing of the oviduct. Morulae and blastocysts were derived by flushing the uterus. IVP embryos were produced by routine methods. After immunocytochemical staining of the embryos, protein analysis was carried out by confocal laser scanning microscopy. In this manner, significant differences in both the amount and the localization of DNMT1 and DNMT3a could be found.