Untersuchung zur Pharmakokinetik von Salicylsäure nach oraler Applikation von Acetylsalicylsäure beim Pferd

Das Ziel der vorliegenden Dissertation war es, an acht Pferden das Ausscheidungsverhalten von Acetylsalicylsäure und dem Abbauprodukt Salicylsäure nach oraler Applikation in drei verschiedenen Dosierungen zu überprüfen. Des Weiteren sollte in einem In-vitro-Versuch für die Substanzen Acetylsalicylsäure und Salicylsäure die IC50  von COX I und II im Blut bestimmt werden. Die Untersuchung der Urin- und Plasmaproben auf Salicylsäure erfolgte mittels HPLC/MS/MS im Institut für Biochemie der Deutschen Sporthochschule in Köln. Für die Untersuchung der Urinproben wurde eine bereits bestehende Analysemethode modifiziert, während für die Untersuchung der Plasmaproben eine neue Methode eingesetzt wurde. Beide Verfahren wurden anhand folgender Parameter nach EHSLC Kriterien validiert: Präzision, Stabilität, Linearität, Richtigkeit, Nachweisgrenze, Quantifizierungsgrenze, Selektivität und Wiederfindung. Außerdem wurde gezeigt, dass auch nach der Probenverdünnung eine hinreichend genaue Bestimmung der Salicylsäurekonzentration gegeben ist. Für Salicylsäure konnte eine Quantifizierungsgrenze von 5 µg/ml im Urin und 0,3 µg/ml im Plasma festgelegt werden. Die Nachweisgrenze ist mit 1 µg/ml im Urin und 0,1 µg/ml im Plasma bestimmt worden. Im Vor- und Hauptversuch wurden acht Pferden im Cross-over Design die drei Acetylsalicylsäuredosierungen 12,5 mg/kg KGW, 25 mg/kg KGW und 50 mg/kg KGW oral appliziert. Das verwendete Präparat war Pyrinagil. Anschließend wurden einem Studienplan folgend Urin- und Plasmaproben gewonnen. Die Aufarbeitung der Urinproben erfolgte mit einer Festphasenextraktion und nachfolgender Evaporation am Rotationsverdampfer, während für die Plasmaproben die Direktinjektion gewählt wurde. Als interner Standard diente d4-Salicylsäure. Die maximal erreichten Salicylsäurekonzentrationen treten im Durchschnitt nach einer Applikation von 12,5 mg/kg KGW Acetylsalicylsäure nach zwei Stunden im Urin mit einer Konzentration von ca. 2675 µg/ml und im Plasma nach 1,5 Stunden mit ca. 17 µg/ml Salicylsäure auf. Nach einer Applikation von 25 mg/kg KGW Acetylsalicylsäure ist im Mittel das Maximum an Salicylsäure nach zwei Stunden im Urin mit einer Konzentration von ca. 2785 µg/ml und im Plasma nach 1,5 Stunden mit ca. 23 µg/ml Salicylsäure zu erwarten. Bei Applikation von 50 mg/kg KGW Acetylsalicylsäure liegt die zu erwartende höchste Konzentration bei ca. 3915 µg/ml fünf Stunden nach der Applikation und im Plasma bei 45 µg/ml Salicylsäure nach 1,5 Stunden. In einer zusätzlichen pharmakodynamischen In-vitro-Studie wurde die Hemmung der Cyclooxygenasen I und II durch Acetylsalicylsäure, Salicylsäure, Flunixin-Meglumin und Phenylbutazon in den Konzentrationen 0,1 bis 1000 µmol/l in einem Vollblut Assay getestet. Für die Acetylsalicylsäure wurde eine IC50 für die COX I-Hemmung von 1,17 µmol/l und eine IC50 für die COX II-Hemmung von 12,25 µmol/l berechnet. Eine Berechnung der IC50 für die Salicylsäure war aufgrund der mangelnden hemmenden Wirkung auf die beiden Cyclooxygenasen nicht möglich. Für Flunixin-Meglumin ist die IC50 für COX I bei kleiner als 0,1 µmol/l und für die COX II bei 0,1 µmol/l anzusiedeln, Phenylbutazon verhält sich wie Acetylsalicylsäure. Nach oraler Applikation von Acetylsalicylsäure werden die bestehenden Grenzwerte für Salicylsäure kurzzeitig überschritten (FN mit 625 µg/ml im Urin und 5,4 µg/ml im Plasma und FEI mit 750 µg/ml im Urin und 6,5 µg/ml im Plasma). Über eine Erhöhung der Grenzwerte sollte nachgedacht werden.